Next: Przygotowanie próbek RNA
Up: Szczegółowy opis hybrydyzacji northern
Previous: Szczegółowy opis hybrydyzacji northern
- Rozpuść 0,39g świeżej agarozy w wodzie wolnej od RNaz. Wsyp agarozę do 26,1
ml wody i rozpuść w kuchence mikrofalowej mieszając co kilkadziesiąt sekund.
Po rozpuszczeniu agarozy pozostaw ją na 5 minut w temp. 90-100oC (można w kuchence
nastawionej na najmniejszą moc lub wstawiając do zlewki ze świeżo zagotowaną
wodą).
- Dodaj 3ml buforu 10xMOPS-EDTA[3] (trzeba mieszać i/lub dodawać lekko ogrzany
bufor aby uniknąć krzepnięcia żelu).
- Schłódź żel do temp. ok. 50oC (nie jest zbyt gorąca aby przyłożyć do policzka).
Najlepiej schładzać w wodzie w styropianowym pudełku (dodaj do pudełka tyle
wody ile w zlewce jest żelu).
- Pod wyciągiem dodaj dwa razy 0,76ml 37% formaldehydu6
(wtym stężeniu zwany jest formaliną).
- Wylej żel do dokładnie wypoziomowanej wanienki. (Żele do northern'a nie powinny
być grubsze niż 3mm, dlatego ważne jest dokładne wypoziomowanie wanienki na
żel).
- Żel powinien powoli zastygać więc trzeba wylewać go w ciepłym miejscu (ale nie
cieplej niż 37oC).
Piotr Kozbial
2000-07-02