Etapy układania transferu (downword).

-

1. Na dnie plastikowej wanienki (najlepiej o stromych brzegach) połóż prostokątną pieluchę lub kilkucentymetrową warstwę bibuły lub plastikowe pudełko.
2. Na pieluchę (lub pudełko) połóż 2-3 dosyć duże (znacznie większe od żelu) kawałki zwilżonego (10x SSC) papieru Whatman 3M.
3. Połóż namoczony przez 5 minut (w wodzie) filtr nylonowy z obciętym rogiem, filtr powinien być większy od żelu o około 1mm.
4. Na filtr nylonowy połóż żel, w tej samej orientacji co w aparacie do elektroforezy. Na zdjęciu żelu które uprzednio zrobiłeś zaznacz położenie obciętego rogu filtru. Żel lepiej się układa jeśli polejemy filtr nylonowy odrobiną buforu 10x SSC.
5. Przebijając studzienki żelu, zaznacz ołówkiem (najlepiej o długim cienkim rysiku) położenie studzienek (jest to bardzo ważne, jeśli o tym zapomniałeś to dalsze etapy nie mają sensu).
6. Na żel połóż kilka warstw zwilżonego (w 10x SSC) papieru Whatman 3M (dokładnie tej samej wielkości co żel).
7. Wytnij kilka pasków papieru Whatman 3M o szerokości równej długości żelu. Pasek papieru musi być na tyle długi, aby położony na żelu sięgał obydwoma końcami do stojącego nad wanienką pojemnika z buforem (10x SSC).
8. Zwilż te długie paski Whatman'a 3M w buforze (10x SSC) i połóż je na żelu. Połóż tak aby żel leżał w połowie ich długości.
9. Na wanience z transferem postaw mniejszą wanienkę na bufor (10x SSC).
10. Włóż końce długich pasków Whatman'a do wanienki na bufor i nalej do niej 10xSSC.

Tak ustawiony transfer idzie przez 1-3 godziny w chłodni. Czas zależy od grubości i stężenia żelu oraz od wielkości analizowanych transkryptów (im większe transkrypty tym dłuższy czas transferu). Pamiętaj, aby w czasie trwania transferu nie zabrakło buforu 10x SSC!