Next: Etapy układania transferu (downword).
Up: Szczegółowy opis hybrydyzacji northern
Previous: Elektroforeza
Po elektroforezie żel płuczemy 2 razy po 20 min w 10xSSC (aby usunąć formaldehyd).
Jeśli żel był barwiony bromkiem inaczej niż to opisano powyżej, to zapewne przed
transferem należy go też inaczej traktować.
Transfer downwoard (``w dół'') układa się w wysokiej wanience plastikowej
i składa się z następujących warstw:
- Wanienka z 10xSSC
- Whatman 3M7
po którym spływa 10xSSC.
- Kilka warstw Whatman 3M, tak aby roztwór SSC spływający z wanienki równomiernie
zwilżał żel leżący poniżej.
- Żel obłożony dookoła parafilmem. Parafilm uniemożliwia przepływ roztworu poza
żelem.
- Filtr nylonowy (na nim zatrzymuje się RNA przemieszczające się z buforem przepływającym
przez żel).
- Kilka warstw Whatman 3M (umożliwia równomierny odpływ buforu 10xSSC, który przesącza
się z membrany powyżej).
- Szeroki pasek Whatmana 3M umożliwiający spływanie buforu na dno wanienki.
- Stolik (np. plastikowe pudełko lub warstwa celulozowych gąbek) dostatecznie
wysoki, aby spływający z góry bufor nie zatopił nam transferu.
Subsections
Piotr Kozbial
2000-07-02