next up previous
Next: Etapy układania transferu (downword). Up: Szczegółowy opis hybrydyzacji northern Previous: Elektroforeza

Transfer RNA z żelu na membranę

Po elektroforezie żel płuczemy 2 razy po 20 min w 10xSSC (aby usunąć formaldehyd). Jeśli żel był barwiony bromkiem inaczej niż to opisano powyżej, to zapewne przed transferem należy go też inaczej traktować.

Transfer downwoard (``w dół'') układa się w wysokiej wanience plastikowej i składa się z następujących warstw:

  1. Wanienka z 10xSSC
  2. Whatman 3M7 po którym spływa 10xSSC.
  3. Kilka warstw Whatman 3M, tak aby roztwór SSC spływający z wanienki równomiernie zwilżał żel leżący poniżej.
  4. Żel obłożony dookoła parafilmem. Parafilm uniemożliwia przepływ roztworu poza żelem.
  5. Filtr nylonowy (na nim zatrzymuje się RNA przemieszczające się z buforem przepływającym przez żel).
  6. Kilka warstw Whatman 3M (umożliwia równomierny odpływ buforu 10xSSC, który przesącza się z membrany powyżej).
  7. Szeroki pasek Whatmana 3M umożliwiający spływanie buforu na dno wanienki.
  8. Stolik (np. plastikowe pudełko lub warstwa celulozowych gąbek) dostatecznie wysoki, aby spływający z góry bufor nie zatopił nam transferu.



Subsections

Piotr Kozbial
2000-07-02