Prehybrydyzacja

1. Przygotuj bufor do prehybrydyzacji[1], dodając świeżo zdenaturowane DNA ze spermy łososia (lub jakiekolwiek pofragmentowane genomowe DNA, np. Ze spermy śledzia, z grasicy cielęcej, itp.)
2. Do suchej, czystej butelki do hybrydyzacji włóż filtr z zapieczonym RNA. Strona z RNA jest skierowana do wnętrza butelki. Końce filtra mogą się minimalnie zazębiać. Jeśli filtr jest zbyt duży, to należy położyć go na siateczce nylonowej (nylon mesh) która umożliwi dostęp buforów do wszystkich miejsc filtra.
3. Następnie ostrożnie (aby się nie pienił) wlewamy bufor do prehybrydyzacji. Zwijamy pęsetą filtr i przechylając butelkę pozwalamy filtrowi nasiąknąć buforem. Nasiąkanie rozpoczynamy od krawędzi leżącej od strony butelki i powoli przekręcając butelkę i odwijając filtr dochodzimy z nasączaniem do krawędzi leżącej od wewnątrz butelki.
4. Butelkę wkładamy do pieca na hybrydyzacji nastawionego na 42oC (uwaga jeśli po kilkudziesięciu minutach filtr się zwinie w rulonik, to trzeba wyjąć butelkę i włożyć ją odwrotnie).

Prehybrydyzację prowadzimy nie krócej niż 2 godziny i nie dłużej niż przez noc (optymalnie 4-6 godzin). Dobrze jest wstawić do tego samego pieca bufor do hybrydyzacji - tak aby w chwili, gdy będzie on potrzebny miał już odpowiednią temperaturę.