Płukanie filtru po hybrydyzacji

Po hybrydyzacji sondę zlewamy do 15 ml plastikowej butelki i przechowujemy w -20oC w lodówce zamrażarce w pracowni izotopowej (pamiętaj o BHP). Taką sondę można używać jeszcze przez kilkanaście dni, ale nie więcej niż 3 razy. Przed każdym użyciem pamiętaj o jej denaturacji (65oC, 10min).

Płuczemy w dużej ilości (około 25-50ml) roztworów o rożnej stringency (ostrości). Roztwory muszą mieć właściwą temperaturę już w chwili wlewania.

• 25oC - 2x SSC; 0,1%SDS -30 sekund (odpłukuje resztki roztworu do hybrydyzacji)
• 25oC - 2x SSC; 0,1%SDS -dwa razy po 15 minut (pierwszym i ostatnim stężeniem SSC płuczemy dwukrotnie)
• 25oC - 1x SSC; 0,1%SDS -20 minut
• 25oC - 0,1x SSC; 0,1%SDS - 20 minut.
• 42oC - 0,1x SSC; 0,1%SDS - 20 minut (na tym płukaniu kończymy dla sond dosyć dobrze homologicznych).
• 65oC - 0,1x SSC; 0,1%SDS - 20 minut - dwa razy po 15 minut (dla sond o 100% homologii).

Po ostatnim płukaniu szybko zawijamy filtr w cienką plastikową folie (nie wolno dopuścić do jego wyschnięcia) i ewentualnie przyklejamy dobrze (taśmą klejącą) do zafoliowanej tekturki z zaznaczonymi radioaktywnym atramentem punktami odniesienia.

Tak przygotowany filtr sprawdzamy wstępnie licznikiem G-M. Następnie w ciemni fotograficznej kładziemy go na kliszy rentgenowskiej, tak aby strona filtru z RNA stykała się z kliszą. Po drugiej stronie kliszy kładziemy ekran świecący pod wpływem promieniowania, które przeleciało przez kliszę i wzbudza na ekranie fluorescencję która także zaczernia kliszę. Wzbudzona na ekranie fluorescencja trwa dłużej w -80oC, dlatego całość umieszczamy w specjalnej kasecie i eksponujemy w REVCO.

Kliszę rentgenowską wywołujemy według dołączonego do niej opisu.