Denaturacja sondy i hybrydyzacja.

Sondę oczyszczoną na Sephadex'ie denaturujemy gotując ją przez około 7 minut. UWAGA Należy zabezpieczyć eppendorfówke przed samoczynnym otwarciem (np. robiąc dziurkę w wieczku, lub wzmacniając zamknięcie eppendorfówki przez właściwe i bardzo mocne owinięcie folią aluminiową - owijamy folią aluminiową i ubijamy tę folie przez wciśnięcie do statywu).

UWAGA! Otwarcie eppendorfówki podczas denaturacji spowoduje rozpryśnięcie izotopu po całym pomieszczeniu - zabezpiecz się przed taką ewentualnością!

1. Eppendorfówkę zawierającą zdenaturowaną sondę dopełniamy buforem do hybrydyzacji.
2. Wylewamy bufor do prehybrydyzacji i zastępujemy go minimalną ilością buforu do hybrydyzacji. Im mniej buforu tym lepiej, ale musi być go dostatecznie dużo żeby filtr nylonowy był nim cały czas na całej długości obmywany. Musimy pamiętać też aby ilość dodanego z buforem TE izotopu nie rozcieńczyła w sposób istotny buforu do hybrydyzacji.
3. Do butelki wlewamy naszą sondę (wlewany na samo dno butelki, gdzie zebrał się nasz bufor). Nie wolno wlewać sondy bezpośrednio na membranę.

Hybrydyzację w buforach zawierających formamid prowadzimy nie krócej niż 24 godziny (najlepiej przez 36 godzin). Temperatura hybrydyzacji zależy od stopnia homologii i długości sondy. Zwykle wynosi ona 42oC.