Próbki przygotowywane dla mikroskopii immunofluorescencyjnej utrwalano przez
2 godziny w 4% paraformaldehydzie w buforze PIPES (kwas 1,4-piperazodietanosulfonowy,
0,05 M, pH 7,0) w temperaturze pokojowej. Po przepłukaniu preparaty poddawano
30 min trawieniu 0,5% cellulazą i przenoszono na 15 min do 1% Tritonu X-100
w buforze PIPES. Próbki płukano przez 15 min tym samym buforem, a następnie
zgniatano na szkiełkach mikroskopowych opłaszczonych poli-L-lizyną. Preparaty
inkubowano przez 12 godzin w temperaturze 4C w solnym buforze fosforanowym
(PBS, 0,46 M NaCl, 3 mM KCl, 0,2 M Na2HPO4, 32 mM KH2PO4) zawierającym mysie
przeciwciało pierwszorzędowe skierowane przeciwko
-tubulinie (Sigma),
rozcieńczone w stosunku 1:200 oraz sprzężone z fluoresceiną (FITIC, Sigma) kozie
przeciwciało drugorzędowe skierowane przeciwko mysiemu przeciwciału pierwszorzędowemu,
rozcieńczone w PBS w stosunku 1:150. Próbki barwiono następnie DAPI (1 ?g/ml)
i zatapiano w mieszance glicerolowej citifluor. Obserwacje prowadzono za pomocą
mikroskopu fluorescencyjnego Nikon Microphot 5A.